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        當前位置:首頁 > 產品中心 > PCR&q-PCR > RT-PCR > AN33L718All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)

        All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)

        簡要描述:All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)是一款高效、便捷且高質量的單鏈 cDNA 合成試劑盒,包含熱穩定的 M-MLV GIII 逆轉錄酶及其反應緩沖液、RNA 酶抑制劑、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和隨機引物等所有逆轉錄反應所需組分,僅需添加 RNA 模板和水即可啟動反應,生成的 cDNA 主要用于后續的 qPCR 分析。

        • 產品型號:AN33L718
        • 廠商性質:生產廠家
        • 更新時間:2024-09-13
        • 訪  問  量:277

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        詳細介紹

        品牌Life-iLab/李記生物貨號AN33L718、AN33L719
        規格20T、100T供貨周期現貨
        應用領域生物產業

        產品描述

        All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)是一款高效、便捷且高質量的單鏈 cDNA 合成試劑盒,包含熱穩定的 M-MLV GIII 逆轉錄酶及其反應緩沖液、RNA 酶抑制劑、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和隨機引物等所有逆轉錄反應所需組分,僅需添加 RNA 模板和水即可啟動反應,生成的 cDNA 主要用于后續的 qPCR 分析。

        提取的RNA 樣本常存在基因組DNA(gDNA)污染,可能導致gDNA 與 cDNA 在 qPCR 中同時擴增,影響定量準確性。本試劑盒通過 dsDNase 高效去除gDNA,特異性降解雙鏈 DNA或DNA-RNA 雜合鏈中的 DNA 鏈,并在逆轉錄溫度下快速不可逆失活。與傳統使用的 DNase I對比,無需額外 EDTA 處理,簡化實驗流程,降低逆轉錄反應的抑制風險。

        本試劑盒可在同一管中進行逆轉錄和gDNA去除兩個反應,操作簡便,可有效降低復雜加樣過程造成的樣品污染和 RNA 降解的風險。但若基因組污染嚴重程度,建議選擇采用去除gDNA 污染與逆轉錄分開進行的操作方法。

        訂購信息

        產品名稱

        貨號

        規格

        All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)

        AN33L718

        20T

        All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)

        AN33L719

        100T

        產品組分

        組分

        AN33L718(20T)

        AN33L719(100T)

        A.  All-in-One   RT MasterMix

        80 μL

        400 μL

        B.  dsDNase

        20 μL

        2*50 μL

        C.  10×   dsDNase Bu?er

        40 μL

        200 μL

        D.  Nuclease-Free   Water

        400 μL

        2*1 mL

        運輸與保存

        藍冰運輸。-20℃保存,有效期24個月。

        使用方法

        1. 針對基因組 DNA 含量低的 RNA 樣品(推薦方案)

        ① 于冰上配制如下反應體系:

        試劑

        使用量

        模板 RNAa

        50   ng~1 μg

        All-in-One   RT MasterMix

        4 μl

        dsDNase

        1 μl

        Nuclease-Free   Water

        To 20   μl

        a . 推薦使用試劑盒提取的高質量 RNA 作為模板。

        ② 37℃溫育 2 min,以去除gDNA 污染;

        ③ 55℃溫育 15 min;

        ④ 反應結束后,85℃溫育 5 min 以終止反應;

        ⑤ 迅速將獲得的 cDNA 置于冰上,用于后續實驗;或立即保存于 -20℃。

        2. 針對基因組 DNA 含量高的 RNA 樣品

        (1)  基因組 DNA 污染去除

        ① 于冰上配制如下反應體系:

        試劑

        使用量

        模板 RNAa

        50   ng~1 μg

        dsDNase

        1 μl

        10×   dsDNase Bu?er

        1 μl

        Nuclease-Free   Water

        To 10   μl

        a.    推薦采用試劑盒提取的 RNA 作為模板。

        ② 輕柔吸打混勻,瞬離;

        ③ 37℃溫育 2 min,以去除基因組 DNA 污染;

        注:若 RNA 中基因組 DNA 污染嚴重,可適當延長 37℃溫育時間至 5 min。

        ④ 65℃溫育 2 min,使 dsDNase 失活, 冰上放置。

        (2)  第一鏈 cDNA 合成

        ① 于冰上配制如下反應體系:

        試劑

        使用量(實驗組)

        “實驗 (1)"反應產物

        10 μl

        All-in-One   RT MasterMix

        4 μl

        Nuclease-Free   Water

        To 20   μl

        ② 輕柔吸打混勻,瞬離;

        ③ 50℃溫育 15 min;

        注:若目標 RNA 不含 Poly(A) 結構,可預先 25℃溫育 10 min。

        ④  反應結束后, 85℃溫育 5 min,以終止反應;

        ⑤ 將獲得的 cDNA 溶液置于冰上,用于后續實驗。

        注:cDNA 溶液置于 -20℃儲存,建議不超過 1 周;置于 -80℃可長期儲存。

        注意事項

        1. 預混液中已包含 Oligo(dT)20VN 和隨機引物,適用于含有 Poly(A) 結構的真核生物 mRNA,以及不含 Poly(A) 結構的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板,但不適用于 miRNA 等小RNA模板。

        2. 由于隨機引物會在RNA的任意位置啟動逆轉錄,因此不建議使用本產品進行真核生物全長cDNA的克隆。

        3. 本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。

        本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。



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